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成都除虫公司原核表达的重组的沙漠蝎occitoraw to- /1伽_)昆虫毒素rBotIT6注射处理德国小蠊,观察 24小时,LD5。是75 n&/100 mg,相当于每只小蠊30 ng。对应的**昆虫毒素nBotIT6毒力LD5。为32. 5 ng/100 mg。重组昆虫毒素rB〇tIT6注射德国小蠊 后,虫体显示附肢伸展、运动失调、腹部向上倒卧等 症状,而同剂量注射自蝎子毒囊中分离纯化的** nBotIT6毒素也出现相同症状,但是引起的瘫痪是可逆的,并且有时发生无症状的死亡。
BmKITl是从东亚钳蝎毒液中分离的一种兴奋 性昆虫神经毒素,结构由18个氨基酸残基组成的信 号肽序列和一个由70个氨基酸残基组成的成熟的蝎昆虫神经毒素组成。将BmKITl基因插入昆虫病 毒黑胸大赚浓核病毒(?PeripZareefa/bZigiriosa densovir- US,P£DNV)基因组中,与**型的PfDNV共转染黑 胸大嫌(Peripkmeta/idiginosa),获得了含 BmKITl 夕卜 源基因的重组PfDNV病毒粒子。黑胸大蠊取食含 6xl04重组与**型病毒粒子/g剂量的饲料,48小 时后即在试虫体内检测到蝎昆虫神经毒素Bm- KIT1,且半数致死时间1^5。为10. 04天,比**型病 毒提前32%。将蝎毒素BmKITl基因亚克隆入含有 埃及伊蚊浓核病毒(Aecfe aegjpri densoviras,AeD- NV)全基因组中,与**型的AeDNV基因组共转染 C6/36细胞,获得含BmKm外源基因的重组 AeDNV病毒粒子。采用real time PCR对病毒进行 定量,以重组病毒与**病毒共感染实验室白纹伊蚊各期幼虫检测其杀虫效果。结果显示转染后48 小时BmKITl在C6/36 cell中表达,荧光显微镜下 可见绿色荧光。重组病毒感染蚊虫48小时后,荧光 显微镜下可见绿色荧光。重组病毒感染组蚊虫死亡率明显**对照组,死亡高峰提前,显示表达Bm- KIT1的重组埃及伊蚊浓核病毒能更快速有效毒杀蚊虫,半数致死时间1^5。为4. 5天,比对应的**型 AeDNV病毒提前57%。